Ⅱ级生物安全柜在出厂前就已经完成了物理检测验证<包括噪声、照度、向内风速、下送风速、气流流型等)，生物安全柜在实验室安装后，主要是生物学检测，它包括人员保护、样品保护、交叉污染保护和出风口泄漏检测验证。其中人员保护、样品保护、交叉污染保护的生物学检测可以参照美GG家标准NSF49《Ⅱ级(层流)生物安全柜》或者参照G家食品药品管理局的《生物安全柜》(YY0569―2005)或者是《生物安全柜应用指南――原理、使用和验证》。
(一)人员保护检测验证
合格判定标准：从6个AGI-30采样器采集到粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌的CFU数量，在每次检测时不得超过10个。采样时间达30min时，裂隙式空气采样器的平板计数不得超过5个菌落。必须重复3次试验。对照平板必须是阳性结果。当平板含有300个以上的粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌菌落时，即为阳性。
(二)试验样品保护检测验证
合格判定标准：每次试验中，在琼脂平板上粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌的菌落数不得超过5个。必须重复3次试验。对照平板必须是阳性结果。当平板含有300个以上的粘质沙雷菌或枯草芽孢杆菌菌落时，即为阳性。
(三)交叉污染检测验证
合格判定标准：从攻击侧壁到距离侧壁36cm之间的一些琼脂平板可以得到粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌菌落，它们用作阳性对照。每次测试时，在大于38cm中心处的琼脂平板所得到的菌落总数不得超过2个。在安全柜的左侧和右侧各做3次重复实验。
(四)出风口泄漏检测验证
出风口泄漏检测是在美G标准NSF49、欧洲标准ENl2469中没有列出的检测验证项目。但是，在对进口的Ⅱ级生物安全柜和G产的Ⅱ级生物安全柜出风口泄漏检测中，发现确实存在泄漏的情况，且G产的泄漏率比进口的要高。导致出风口泄漏的主要原因有两个：一是HEPA滤器与固定框之间密封不严，二是HEPA滤器在安装过程中有损伤。对出风口的生物检测验证可以及时发现泄漏。
出风口泄漏检测具体操作方法可以《生物安全柜应用指南――原理、使用和验证》的人员保护测试验证中的气溶胶发生，采样用Andersen 2级采样器在出风口处采样30min。合格判定标准：每次试验中，在琼脂平板上粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌的菌落数不得超过5个。必须重复3次试验。
